ELISA實驗技巧：ELISA（雙抗體夾心法）檢測HBsAg

以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標本加入，共同孵育后，抗原結合于包被抗體上，再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs)，酶標抗體連接到抗原上，zui后加入底物溶液，根據顏色反應來判定抗原含量。

【材料】HBsAg試劑盒，本試劑盒含：
1、包被抗-HBs反應條
1瓶
2、酶結合物
1瓶
3、HBSAg陽性對照
1瓶
4、HBsAg陰性對照
1瓶
5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋
1瓶
6、顯色劑(TMB)A
1瓶
7、顯色劑(TMB)B
1瓶
8、終止液
1瓶

【方法】

1、加入待測標本每孔0.05ml，并設HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔，然后加入酶結合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加)，充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2、洗板:棄去反應條孔內液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復五次后拍干。
3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml)，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml)，混勻，37℃孵育10分鐘。
4、每孔加終止液1滴(0.05ml)，混勻。

【結果】

比色法:波長450nm，先用空白孔校零點，然后讀取各孔光密度值。
樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性，否則為陰性。
備注：陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。陽性對照OD值≥0.8，實驗結果有效。

【注意事項】
1、試劑盒置2℃～8℃保存。
2、使用前試劑應搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。
3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔條，置室溫平衡30分鐘后再行測試，余者應及時封存于冰箱中以備后用。
4、待測標本不可用NaN3防腐。
5、不同批號試劑請勿通用。
6、結果判斷須在10分鐘內完成。
7、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結晶時，請置37℃至溶解。